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BD流式細胞儀的檢測范圍和應用領域

發布時間:2016-10-31瀏覽:2158次

一、BD流式細胞儀的檢測范圍

1.流式細胞儀可以檢測細胞結構,包括:細胞大小、細胞粒度、細胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細胞周期、R NA 含量、蛋白質含量。
2.流式細胞儀可以檢測細胞功能,包括:細胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原、細胞活性、細胞內細胞因子、酶活性、激素結合位點和細胞受體。
二、BD流式細胞儀的臨床應用
1.流式細胞術在腫瘤學中的應用:流式細胞術可以檢測腫瘤細胞增殖周期、檢測腫瘤細胞表面標記、癌基因表達產物、進行多藥耐藥性分析、檢測凋亡;2.流式細胞術在血液學中的應用:檢測白血病和淋巴瘤細胞、活化血小板、造血干細胞(CD34+)計數、白血病與淋巴瘤的免疫分型、網織紅細胞計數、細胞移植的交叉配型和免疫狀態監測;3.流式細胞術在免疫學中的應用:可以進行淋巴細胞及其亞群分析、淋巴細胞免疫分型、檢測細胞因子。
三、BD流式細胞儀的科研應用
主要有細胞動力學功能研究、環境微生物分析、流式細胞術與分子生物學研究。
四、流式細胞術常規檢測時的樣品制備
(一) 直接免疫熒光標記法
取一定量細胞(約1 × 106 細胞/ml ),直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應(如做雙標或多標染色,可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入),孵育20-60分鐘后,用PBS(pH7.2 - 7.4)洗1-2 次,加入緩沖液重懸,上機檢測。本方法操作簡便,結果準確,易于分析,適用于同一細胞群多參數同時測定。雖然直標抗體試劑成本較高,但減少了間接標記法中較強的非特異熒光的干擾,因此更適用于臨床標本的檢測。
(二) 間接免疫熒光標記法
取一定量的細胞懸液(約1X106 細胞/ml ),先加入特異的*抗體,待反應完全后洗去未結合抗體,再加入熒光標記的第二抗體,生成抗原-抗體-抗抗體復合物,以FCM檢測其上標記的熒光素被激發后發出的熒光。本方法費用較低,二抗應用廣泛,多用于科研標本的檢測。但由于二抗一般為多克隆抗體,特異性較差,非特異性熒光背景較強,易影響實驗結果。所以標本制備時應加入陰性或陽性對照。
另外,由于間標法步驟較多,增加了細胞的丟失,不適用測定細胞數較少的標本。

 

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